人髓過(guò)氧化物酶試劑盒
人髓過(guò)氧化物酶試劑盒(Human Myeloperoxidase, MPO Kit)是一款專(zhuān)門(mén)用于體外定量檢測(cè)人來(lái)源生物樣本中髓過(guò)氧化物酶(MPO)含量的專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)試劑組合,核心應(yīng)用于基礎(chǔ)科研、臨床前研究領(lǐng)域,尤其適配人體炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激調(diào)控、免疫細(xì)胞功能及相關(guān)疾病(炎癥性疾病、心血管疾病、肺部疾病、自身免疫性疾病)研究。髓過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase, MPO)是一種含鐵血紅素的過(guò)氧化物酶,主要由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞合成并釋放,廣泛存在于人血清、血漿、組織勻漿、痰液及相關(guān)細(xì)胞樣本中,核心功能是參與機(jī)體固有免疫防御,催化過(guò)氧hua氫與氯離子反應(yīng)生成次氯酸,清除病原體,同時(shí)參與炎癥反應(yīng)調(diào)控及氧化應(yīng)激過(guò)程,其表達(dá)及含量異常與人體炎癥反應(yīng)過(guò)度激活、組織氧化損傷、免疫功能紊亂及相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),是相關(guān)疾病機(jī)制研究、炎癥程度評(píng)估及抗炎藥物篩選的核心檢測(cè)指標(biāo)。本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)原理設(shè)計(jì),集成了檢測(cè)所需全部試劑,具備特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作便捷、結(jié)果穩(wěn)定、物種針對(duì)性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì),可快速、精準(zhǔn)完成人各類(lèi)樣本中髓過(guò)氧化物酶的定量檢測(cè),為人炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激調(diào)控相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)提供標(biāo)準(zhǔn)化、可靠的數(shù)據(jù)支撐,適配不同科研場(chǎng)景的檢測(cè)需求。
檢測(cè)原理
本試劑盒采用雙抗體一步夾心法ELISA原理,專(zhuān)門(mén)針對(duì)人髓過(guò)氧化物酶優(yōu)化反應(yīng)體系,有效規(guī)避人體內(nèi)其他過(guò)氧化物酶家族成員、免疫細(xì)胞相關(guān)蛋白及雜蛋白的交叉干擾,確保檢測(cè)精準(zhǔn)度與適用性,契合炎癥相關(guān)酶類(lèi)檢測(cè)的核心需求:
酶標(biāo)板預(yù)先包被人髓過(guò)氧化物酶特異性捕獲抗體,實(shí)驗(yàn)時(shí)依次加入人樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及HRP標(biāo)記的人髓過(guò)氧化物酶檢測(cè)抗體,經(jīng)37℃恒溫溫育后,抗體與樣本/標(biāo)準(zhǔn)品中的MPO特異性結(jié)合,形成“捕獲抗體-MPO-檢測(cè)抗體"復(fù)合物;經(jīng)徹di洗滌去除未結(jié)合的多余試劑(如未結(jié)合的檢測(cè)抗體、雜蛋白、組織基質(zhì)雜質(zhì))后,加入TMB底物液,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,加入終止液(硫酸溶液)后變?yōu)辄S色,顏色深淺與樣本中人髓過(guò)氧化物酶的含量呈正相關(guān),通過(guò)酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本中人髓過(guò)氧化物酶的具體含量。該原理適配低濃度炎癥相關(guān)酶類(lèi)檢測(cè),可有效避免組織基質(zhì)雜質(zhì)、其他過(guò)氧化物酶的非特異性結(jié)合,保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,尤其適配人血清、血漿、炎癥組織勻漿、中性粒細(xì)胞培養(yǎng)液等低濃度MPO樣本的精準(zhǔn)檢測(cè)。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 物種特異性強(qiáng),無(wú)交叉干擾:采用人髓過(guò)氧化物酶專(zhuān)屬特異性單克隆抗體,可特異性識(shí)別人來(lái)源樣本中的MPO,有效規(guī)避小鼠、大鼠等其他物種同源過(guò)氧化物酶及人體內(nèi)其他過(guò)氧化物酶家族成員、免疫細(xì)胞相關(guān)蛋白的干擾,同時(shí)避免樣本中雜蛋白、組織基質(zhì)雜質(zhì)的非特異性結(jié)合,確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,批內(nèi)變異系數(shù)CV<5%,板間變異系數(shù)CV<8%,交叉反應(yīng)率<5%,保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)性。
2. 靈敏度高,檢測(cè)范圍廣:ELISA法檢測(cè)范圍通常為1-100ng/mL,靈敏度可達(dá)0.5ng/mL,可精準(zhǔn)檢測(cè)人低濃度樣本(如人血清、血漿、炎癥組織勻漿、痰液、中性粒細(xì)胞培養(yǎng)液)中的髓過(guò)氧化物酶,滿足不同科研樣本的檢測(cè)需求,標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2≥0.99,線性表現(xiàn)優(yōu)異,適配人體生理及病理狀態(tài)下的含量變化檢測(cè),可精準(zhǔn)區(qū)分正常、炎癥激活狀態(tài)下的MPO水平差異。
3. 操作便捷,效率高效:試劑盒包含檢測(cè)所需全部試劑(預(yù)包被酶標(biāo)板、凍干標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體、濃縮洗滌液、TMB底物液、終止液、封板膜等),無(wú)需額外配制核心試劑,實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)化,全程可在1-2小時(shí)內(nèi)完成,適配96孔板高通量設(shè)計(jì),單次可檢測(cè)96個(gè)樣本,大幅提升實(shí)驗(yàn)效率,新手也可輕松操作。
4. 穩(wěn)定性好,保質(zhì)期長(zhǎng):試劑經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)檢與工藝優(yōu)化,凍干標(biāo)準(zhǔn)品、特異性抗體及底物活性穩(wěn)定,未開(kāi)封試劑盒按要求儲(chǔ)存可穩(wěn)定保存12個(gè)月以上,稀釋后的試劑可短期冷藏使用,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的活性下降,確保不同批次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性,保障實(shí)驗(yàn)重復(fù)性;標(biāo)準(zhǔn)品采用專(zhuān)用蛋白保護(hù)緩沖液配制,密封性好,可有效防止降解,進(jìn)一步提升試劑穩(wěn)定性。
5. 適配性廣,場(chǎng)景多元:專(zhuān)門(mén)適配人來(lái)源樣本檢測(cè),兼容人血清、血漿(EDTA或肝素抗凝)、組織勻漿(肺部、肝臟、腎臟、炎癥組織等)、細(xì)胞培養(yǎng)液(中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等)、細(xì)胞裂解液、痰液等多種樣本類(lèi)型,廣泛應(yīng)用于人炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激調(diào)控、炎癥性疾病、心血管疾病、肺部疾病、自身免疫性疾病等相關(guān)科研領(lǐng)域,適配基礎(chǔ)科研、抗炎藥物篩選、炎癥程度評(píng)估等實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景。
6. 安全便捷,風(fēng)險(xiǎn)可控:優(yōu)化試劑配方,無(wú)需氯仿、二氯甲烷等有毒有機(jī)溶劑,操作過(guò)程更安全,同時(shí)配套詳細(xì)說(shuō)明書(shū),明確操作步驟、樣本處理及注意事項(xiàng),降低實(shí)驗(yàn)失誤概率,保障實(shí)驗(yàn)安全與順利進(jìn)行;試劑組分均經(jīng)過(guò)無(wú)菌檢測(cè),可有效避免污染風(fēng)險(xiǎn),適配常規(guī)科研實(shí)驗(yàn)室操作。
適用樣本類(lèi)型
本試劑盒專(zhuān)門(mén)適配人來(lái)源樣本,可滿足人炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激調(diào)控相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)的多樣化檢測(cè)需求,具體適用樣本包括:人血清、血漿(EDTA或肝素抗凝)、組織勻漿(肺部、肝臟、腎臟、炎癥組織等)、細(xì)胞培養(yǎng)液(中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等)、細(xì)胞裂解液、痰液。其中,組織勻漿需用預(yù)冷PBS(含蛋白酶抑制劑更佳)制備,低溫冰浴操作,防止MPO降解;血清/血漿樣本采集后需低溫離心處理,避免溶血,新鮮樣本優(yōu)先檢測(cè),若無(wú)法立即檢測(cè)需分裝冷凍保存,避免反復(fù)凍融;痰液樣本需新鮮采集,低溫離心去除雜質(zhì),避免微生物污染導(dǎo)致MPO降解;細(xì)胞裂解液需避免劇烈震蕩,防止蛋白變性,確保檢測(cè)準(zhǔn)確性;組織樣本采集后及時(shí)處理,避免雜質(zhì)干擾,保障MPO活性。(具體樣本處理方法請(qǐng)參考產(chǎn)品說(shuō)明書(shū))
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
(一)儲(chǔ)存條件
1. 未開(kāi)封試劑盒:需置于2-8℃避光密封保存,避免陽(yáng)光直射、溫度波動(dòng)及潮濕環(huán)境,嚴(yán)禁冷凍,未開(kāi)封試劑盒有效期通常為12個(gè)月,具體以說(shuō)明書(shū)標(biāo)注為準(zhǔn)。
2. 組分儲(chǔ)存:凍干標(biāo)準(zhǔn)品、人髓過(guò)氧化物酶特異性抗體、TMB底物液等核心組分需置于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融(≤3次),防止活性喪失;濃縮洗滌液可在2-8℃冷藏保存;標(biāo)準(zhǔn)品及抗體母液稀釋后需存放于4℃,切勿放-20℃低溫處,以免降低效價(jià),稀釋后的抗體避免存放超過(guò)1天;建議在樣本處理時(shí)添加少量蛋白酶抑制劑,防止MPO降解。
3. 稀釋后試劑:稀釋后的洗滌液可在4℃冷藏保存,1周內(nèi)用完;稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體需現(xiàn)配現(xiàn)用,未用完的可短期冷藏,避免反復(fù)凍融及光照;試劑配制需注意保質(zhì)期,夏季即使冷藏也需避免批量配制過(guò)多,防止變質(zhì)。
4. 運(yùn)輸條件:運(yùn)輸時(shí)采用凝膠冷藏包,確保試劑溫度穩(wěn)定在2-8℃,避免劇烈震蕩、暴曬及ji端溫度,防止試劑失效,尤其注意保護(hù)抗體及底物,避免光照直射和溫度驟變。
(二)注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范,實(shí)驗(yàn)器具需提前高壓滅菌處理,加樣時(shí)使用無(wú)菌槍頭,避免試劑及樣本污染,尤其是組織勻漿、痰液和血漿樣本,污染會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高;實(shí)驗(yàn)臺(tái)面需保持清潔,避免試劑交叉污染,減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。
2. 試劑使用前需從冰箱取出,置于室溫(25℃左右)平衡30分鐘以上,避免溫差導(dǎo)致冷凝水干擾實(shí)驗(yàn);試劑配制及加樣時(shí)動(dòng)作輕柔,避免劇烈震蕩,防止試劑失效或抗原抗體變性,同時(shí)避免MPO降解,抗體與樣本孵育時(shí)避免劇烈晃動(dòng),確保抗原抗體充分結(jié)合;實(shí)驗(yàn)用蒸餾水或去離子水需新鮮、高質(zhì)量,自配緩沖液需檢測(cè)pH值。
3. 孵育及顯色過(guò)程需嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間,尤其是顯色反應(yīng)需避光進(jìn)行,避免光照影響顯色效果;終止反應(yīng)后需在10分鐘內(nèi)完成讀數(shù),防止顏色消退,確保檢測(cè)數(shù)據(jù)穩(wěn)定,同時(shí)避免過(guò)度孵育導(dǎo)致非特異性顯色。
4. 不同批次的試劑不可混用,試劑盒配套試劑需單獨(dú)使用,避免與其他試劑盒試劑交叉使用,防止干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,廢棄試劑及耗材需按生物安全規(guī)范妥善處理,避免污染環(huán)境;含終止液的廢液需單獨(dú)收集處理,避免腐蝕設(shè)備。
5. 操作含硫酸的終止液時(shí),需佩戴手套、口罩、護(hù)目鏡,避免皮膚接觸及吸入,防止刺激傷害;實(shí)驗(yàn)臺(tái)面需保持清潔,避免試劑灑落,若不慎接觸皮膚,需立即用大量清水沖洗;試劑瓶蓋需及時(shí)蓋緊,防止揮發(fā)和污染。
6. 若樣本中人髓過(guò)氧化物酶含量超出檢測(cè)范圍,需適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè),不可直接檢測(cè),以免導(dǎo)致結(jié)果偏差;檢測(cè)過(guò)程中可設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照,確保實(shí)驗(yàn)體系正常,陽(yáng)性對(duì)照孔吸光度需落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),否則提示實(shí)驗(yàn)失效;樣本需新鮮采集處理,全程低溫操作并添加蛋白酶抑制劑,避免長(zhǎng)時(shí)間放置或反復(fù)凍融導(dǎo)致MPO降解,影響檢測(cè)結(jié)果;樣本中不可含NaN3,以免抑制HRP活性導(dǎo)致假陰性;避免樣本中組織基質(zhì)雜質(zhì)或痰液雜質(zhì)過(guò)多,可提前離心純化處理。
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