人蛋白激酶PKB試劑盒
人蛋白激酶PKB試劑盒(Human Protein Kinase B Kit,PKB Kit),又稱人蛋白激酶Akt試劑盒,是基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理研發(fā)的體外診斷/科研檢測試劑盒,可特異性檢測人血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞培養(yǎng)上清中人蛋白激酶PKB(Protein Kinase B,PKB/Akt)的含量,經(jīng)特異性驗證、靈敏度測試及重復(fù)性實驗確認(rèn),無交叉反應(yīng),檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠,無試劑降解、雜菌污染等問題。蛋白激酶PKB(Akt)是一種絲an酸/蘇an酸激酶,核心參與PI3K/Akt信號通路調(diào)控,介導(dǎo)細(xì)胞增殖、分化、凋亡、代謝及遷移等關(guān)鍵生理過程,其異常激活與腫瘤發(fā)生發(fā)展、糖尿病、心血管疾病及神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān),是信號通路研究、相關(guān)疾病輔助診斷、病情監(jiān)測及藥物篩選的重要指標(biāo)。本試劑盒核心特征是特異性強(qiáng)、操作便捷、檢測快速,可精準(zhǔn)定量樣本中PKB含量,廣泛應(yīng)用于臨床檢驗、分子生物學(xué)科研、抗腫瘤/降糖藥物篩選、信號通路機(jī)制研究等領(lǐng)域,是臨床、科研領(lǐng)域的核心激酶相關(guān)檢測工具。
檢測原理
本試劑盒的核心檢測原理,基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),聚焦人蛋白激酶PKB(Akt)的抗原抗體特異性結(jié)合特性,結(jié)合激酶類指標(biāo)檢測的精準(zhǔn)需求設(shè)計:試劑盒預(yù)先將PKB特異性抗體包被于酶標(biāo)板上,加入待檢測樣本(血清、血漿等)后,樣本中的PKB會與酶標(biāo)板上的抗體特異性結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物;洗滌去除未結(jié)合的雜蛋白、細(xì)胞碎片、其他激酶及無關(guān)蛋白后,加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的PKB二抗,與復(fù)合物特異性結(jié)合,形成“包被抗體-PKB-酶標(biāo)二抗"的三明治結(jié)構(gòu);再加入底物液(TMB),HRP催化底物發(fā)生顯色反應(yīng),顯色強(qiáng)度與樣本中PKB的含量呈正相關(guān),通過酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),對照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算出樣本中PKB的具體含量。檢測流程規(guī)范:樣本采集后需及時處理(血清/血漿離心分離、細(xì)胞上清收集、組織勻漿破碎離心),按照試劑盒說明書稀釋樣本;酶標(biāo)板平衡至室溫后,依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣本及空白對照,37℃孵育30分鐘;洗滌3-5次后加入酶標(biāo)二抗,37℃孵育20分鐘;再次洗滌后加入底物液,37℃避光孵育15分鐘;加入終止液終止反應(yīng),10分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測定OD值,計算檢測結(jié)果。
產(chǎn)品特點
本產(chǎn)品針對人蛋白激酶PKB(Akt)檢測需求優(yōu)化制備,核心特點如下:1. 特異性強(qiáng):采用高特異性PKB單克隆抗體,可特異性結(jié)合樣本中的PKB(Akt),不與其他絲an酸/蘇an酸激酶、雜蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),檢測特異性>99%,確保檢測結(jié)果精準(zhǔn),有效規(guī)避激酶檢測中的干擾因素;2. 質(zhì)控嚴(yán)格:每批次試劑盒均通過靈敏度、重復(fù)性、特異性及穩(wěn)定性檢測,附完整QC報告,確保批內(nèi)變異系數(shù)(CV)<8%、批間變異系數(shù)(CV)<10%,檢測靈敏度可達(dá)0.1ng/mL,符合臨床檢測與科研標(biāo)準(zhǔn);3. 操作便捷:試劑盒含全套檢測試劑(包被酶標(biāo)板、PKB標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)二抗、底物液、終止液、洗滌液等),無需額外配制核心試劑,步驟簡單,全程可在2.5小時內(nèi)完成,適配常規(guī)實驗室操作,新手易上手;4. 樣本兼容廣:可適配人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿四種核心樣本類型,樣本用量少(僅需50μL/孔),無需復(fù)雜預(yù)處理,僅需簡單離心、稀釋即可檢測,適配腫瘤、糖尿病等相關(guān)科研與臨床多場景樣本;5. 適配場景廣:可用于腫瘤發(fā)生發(fā)展的輔助診斷與療效監(jiān)測,糖尿病、心血管疾病的病情評估,PI3K/Akt信號通路機(jī)制研究,抗腫瘤、降糖、抗炎藥物篩選,以及臨床檢驗、分子生物學(xué)、腫瘤學(xué)實驗室的常規(guī)檢測。
適用樣本類型
本試劑盒適配人源樣本的體外檢測與科研實驗,適用樣本類型明確:人血清樣本(靜脈采血后離心分離,避免溶血,溶血會干擾檢測結(jié)果)、人血漿樣本(EDTA或肝素抗凝,離心分離)、人細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本(腫瘤細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞對數(shù)期上清,離心去除雜質(zhì))、人組織勻漿樣本(腫瘤組織、肝組織、心肌組織等破碎后離心取上清);實驗場景涵蓋肺癌、肝癌、乳腺癌等腫瘤的輔助診斷與療效監(jiān)測,糖尿病、高血壓等代謝及心血管疾病的病情評估,PI3K/Akt信號通路調(diào)控機(jī)制研究,抗腫瘤、降糖藥物篩選與效果評估,以及相關(guān)實驗室的常規(guī)檢測。推薦檢測體系:使用試劑盒配套酶標(biāo)板,酶標(biāo)儀(波長450nm),按照說明書步驟操作;樣本稀釋比例為1:10(組織勻漿可根據(jù)濃度適當(dāng)調(diào)整),標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度為0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ng/mL,參考區(qū)間為0.3~1.4ng/mL(具體以說明書為準(zhǔn))。(具體樣本處理方法請參考產(chǎn)品說明書)
儲存與注意事項
1. 試劑盒需全程2-8℃避光冷藏儲存,嚴(yán)禁-20℃冷凍或常溫放置,避免溫度波動導(dǎo)致試劑降解、抗體活性喪失;2. 標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)二抗等試劑開封后,密封冷藏保存,1個月內(nèi)用完,PKB標(biāo)準(zhǔn)品避免反復(fù)凍融,防止其激酶結(jié)構(gòu)破壞,底物液需避光保存;3. 樣本采集后及時處理,血清/血漿冷藏24小時內(nèi)完成檢測,細(xì)胞上清、組織勻漿冷藏或-20℃短期保存,48小時內(nèi)完成檢測,避免樣本變質(zhì)、PKB降解;4. 操作時嚴(yán)格遵循無菌規(guī)范,佩戴防護(hù)用品,避免試劑、樣本接觸皮膚黏膜;檢測過程中控制孵育溫度與時間,洗滌充分,避免未結(jié)合試劑殘留導(dǎo)致結(jié)果偏差;5. 底物液具有潛在刺激性,終止液為酸性溶液,操作時需謹(jǐn)慎,避免接觸衣物與皮膚,檢測完成后按生物安全規(guī)范處理廢棄試劑與酶標(biāo)板。
訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。