2012-1016
一、培養(yǎng)用液1、未滅菌的試劑:高壓或過濾除菌。2、物品儲放區(qū)不潔:經(jīng)常清潔并作滅菌處理。3、消毒過程不標(biāo)準(zhǔn):檢查高壓滅菌器是否工作正常;過濾后檢查濾膜是否破裂;滅菌后的液體仍需做無菌試驗(yàn)。4、一次性無菌用品不合格:進(jìn)行質(zhì)量檢測或更換供應(yīng)商。二、取材1、原代組織來源有污染,不要把動物帶入培養(yǎng)室處理;2、可能有污染的組織應(yīng)在酒精中浸泡30s-1min,在清洗用的PBS中加入抗生素。三、玻璃器皿1、儲存時灰塵或細(xì)菌孢子進(jìn)入-一消毒后的器皿應(yīng)嚴(yán)密包裹,置于無菌物品放置區(qū);未包裹物品放...
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2012-1015
一、凍存運(yùn)輸使用干冰置于塑料泡沫盒中,處理得當(dāng),可以保存3天。一旦出現(xiàn)融解,細(xì)胞活力將急劇下降。將細(xì)胞凍存管嚴(yán)密包裹,所用塑料泡沫盒應(yīng)該不小于300×300×300mm,壁的厚度約為50mm,內(nèi)部空間為200×200×200mm,這樣大的空間需放入5kg干冰。以zui快的速度將細(xì)胞從液氮轉(zhuǎn)入干冰中,否則細(xì)胞將以10~20℃/min的速度升溫。不能讓溫度高于-50℃。到達(dá)目的地后,即可按常規(guī)復(fù)蘇處理。二、活細(xì)胞運(yùn)輸細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期早期或中期,狀態(tài)良好。如果細(xì)胞密度過大,培...
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2012-1013
一、按劑型分類1、液體試劑①R1和R2分開保存,延長穩(wěn)定性;瓶間差小,沒有復(fù)溶時水質(zhì)引起的差異,使用方便;②可較*排除樣品空白和內(nèi)外源干擾物。2、干粉試劑將各組份溶于液體中分裝再凍干,或用球磨粉碎、或混合后打成片劑,用前再加入量的緩沖液使其溶解(稱復(fù)溶)。二、按試劑組成分類1、單試劑①優(yōu)點(diǎn):操作簡便適用于各類生化分析,節(jié)約試劑位。②缺點(diǎn):配方復(fù)雜(穩(wěn)定劑),穩(wěn)定性,不能*避免內(nèi)外源物質(zhì)干擾。2、雙試劑①優(yōu)點(diǎn):可較*排除樣品空白和內(nèi)外源干擾物,試劑穩(wěn)定,便于儲存,運(yùn)輸和使用,可...
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2012-1012
一、背景細(xì)胞存儲于-170°以下的液氮罐中,在細(xì)胞復(fù)蘇時需要快速地將細(xì)胞凍存管放入37°水浴鍋中快速升溫至37°避免對細(xì)胞造成損傷。在復(fù)蘇過程中凍存管需要用手拿著在搖晃,一個人同時只能拿2-4管,當(dāng)復(fù)蘇較多的細(xì)胞時一個人就無法操作,這給復(fù)蘇細(xì)胞帶來了極大的不便。二、方法改進(jìn)采用一個裝15ml離心管的泡沫板制作一個凍存管托盤,其托盤為:將其底部穿通,孔夠凍存管的大小相當(dāng),使凍存管放入恰好卡住;在托盤中間插一個桿作為手柄。在復(fù)蘇時將凍存管放在泡沫板托盤上,手拿著托盤手柄,將載有凍...
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2012-1010
一、凍存細(xì)胞解凍步驟1、將細(xì)胞凍存管從加有液氮的保溫桶中用鑷子夾牢,快速在37度水浴鍋中擺動,使凍存液迅速解凍融化。注意在這過程中盡量使凍存管蓋位于水面上。2、待凍存管中大部分內(nèi)容物已呈液態(tài)時,將凍存管表面消毒后移入生物安全柜。二、注意事項(xiàng)1、在細(xì)胞復(fù)蘇操作時,應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,可不時搖動凍存管,使之盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高,生長及形態(tài)良好。2、從液氮罐中取出凍存管,有時因凍存管未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因凍存管內(nèi)液氮迅...
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2012-109
酶的校正要滿足在同一方法學(xué)、同一測定條件、與理論計(jì)算的FACTOR值差異不大,沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素,方可進(jìn)行校正。檢驗(yàn)結(jié)果溯源性,得建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ),然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到常規(guī)方法測定中去,使常規(guī)方法測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過程中,永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)對象,以方法學(xué)對比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段。方法學(xué)對比試驗(yàn)常采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,假如斜率接近1,截距較小,這意味著實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法對標(biāo)本測定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對標(biāo)本...
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2012-929
一、原理細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間.從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期.細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度.單個細(xì)胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期.測定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法,細(xì)胞計(jì)數(shù)法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測定細(xì)胞周期的方法.BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養(yǎng)基后,可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料,經(jīng)過兩個細(xì)胞周期后,細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為...
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2012-927
抗體按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能,可將其分為IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五類。1、IgM抗體是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體。它們在與抗原結(jié)合后啟動補(bǔ)體的級聯(lián)反應(yīng)。它們還把入侵者相互連接起來,聚成一堆便于巨噬細(xì)胞的吞噬;2、IgG抗體激活補(bǔ)體,中和多種毒素。IgG持續(xù)的時間長,是*能在母親妊娠期穿過胎盤保護(hù)胎兒的抗體。他們還從乳腺分泌進(jìn)入初乳,使新生兒得到保護(hù);3、IgA抗體進(jìn)入身體的黏膜表面,包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜,中和感染因子。還可以通過母乳的初乳把這種抗體輸送到...
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